DEAE-SephadexA-50(二乙基氨基乙基葡聚糖A-50)為弱堿性陰離子交換劑。用NaOH將CL-型轉(zhuǎn)變?yōu)镺H-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白屬于中性蛋白(等電點(diǎn)為PH6.85-7.5)，其余均屬酸性蛋白。在PH7.2-7.4的環(huán)境中，酸性蛋白均被DEAE-Sephadex A-50吸附，只有γ球蛋白不被吸附。因此，通過(guò)柱層析γ球蛋白便可在洗脫中先流出,而其他蛋白則被吸附在柱上,從而便可分離獲得純化的IgG。
產(chǎn)品參數(shù)
產(chǎn)品名稱：DEAE-Sephadex A-50
基質(zhì)：Sephadex
顆粒大小：40-120μm
最大流速：45cm/h
工作pH：2-9
操作溫度：室溫
保存條件：室溫
A-50實(shí)驗(yàn)步驟
1、預(yù)處理
稱DEAE-Sephadex A-50(下稱A-50)5克，懸于500ml蒸餾水，1小時(shí)后傾去上層細(xì)粒。
按每克A-50加0.5M NaOH 15ml的比例，將A-50浸泡于0.5M NaOH中，攪勻，靜置30分鐘，裝入布氏漏斗(墊有2層濾紙)中抽濾，并反復(fù)用蒸餾水抽洗至PH呈中性；再以
0.5M HCl同上操作過(guò)程處理，最后以0.5M NaOH再處理一次。處理完后，將A-50浸泡于0.1M，PH 7.4 PB中過(guò)夜。
2、裝柱
(1)將層析柱垂直固定于滴定鐵架上，柱底墊一園尼龍紗，出水口接一乳膠或塑料管并關(guān)閉
開(kāi)關(guān)。
(2)將0.1M，PH7.4 PB沿玻璃棒倒入柱中至1/4高度，再倒入經(jīng)預(yù)處理并以同上緩沖液調(diào)
成稀糊狀的A-50。待A-50凝膠沉降2-3cm厚時(shí)，啟開(kāi)出水口螺旋夾，控制流速1ml/分鐘，同時(shí)連續(xù)倒入糊狀A(yù)-50凝膠至所需高度。
(3)關(guān)閉出水口，待A-50凝膠完全沉降后，柱面放一園形濾紙片，以橡皮塞塞緊柱上口，通
過(guò)插入橡皮塞之針頭及所連接的乳膠或塑料管與洗脫液瓶相連接。
3、平衡
啟開(kāi)出水口螺旋夾，控制流速12-14滴/分鐘，使約2倍床體積的洗脫液流出。并以PH計(jì)與電導(dǎo)儀分別測(cè)定洗脫液及流出液之PH值與離子強(qiáng)度是否相同。達(dá)到一致時(shí)關(guān)閉出水口，停止平衡。
4、加樣及洗脫
啟開(kāi)上口橡皮塞及下口螺旋夾，使柱中液體緩慢滴出，當(dāng)柱面液體與柱面相切時(shí)，立即關(guān)閉出水口，以毛細(xì)滴管沿柱壁加入樣品(體積應(yīng)<床體積的2％，蛋白濃度以<100mg為宜)。松開(kāi)出水口螺旋夾使柱面樣品緩慢進(jìn)入柱內(nèi)，至與柱面相切時(shí)，立即關(guān)閉下口，以少量洗脫液洗柱壁2-3次；再放開(kāi)出水口，使洗液進(jìn)入床柱，隨后立即于柱面上加入數(shù)ml洗脫液，緊塞柱上口，使整個(gè)洗脫過(guò)程成一密閉系統(tǒng)。并控制流速12～14滴／分鐘。
5、 收集
開(kāi)始洗脫的同時(shí)就以試管進(jìn)行收集。每管收集3～5ml。共收集10～15管。
6、測(cè)蛋白
以751-G型紫外分光光度計(jì)分別測(cè)定每管OD280nm，與OD260nm，按前述
公式計(jì)算各管蛋白含量。并以O(shè)D280nm為縱座標(biāo)，以試管編號(hào)為橫座標(biāo)，繪制洗脫曲線。
7、合并、濃縮
將洗脫峰的上坡段與下坡段各管收集液分別進(jìn)行合并，以PEG(MW6000)洗縮至所需體積，加入0.02％NaN３防腐劑，于
4℃保存?zhèn)溆谩?br />8、A-50凝膠的再生
在柱上先以2M NaCl洗柱上的雜蛋白至流出液的OD280nm<0.02，再以蒸餾水洗去柱中鹽。然后按預(yù)處理過(guò)程將A-50再處理一遍即達(dá)再生。近期用時(shí)泡于洗脫緩
沖液中４℃保存；近期不用時(shí)，以無(wú)水酒精洗2次，再置50℃溫箱烘干，裝瓶?jī)?nèi)保存。
(四) 注意事項(xiàng)
1 .柱的選擇：從理論上說(shuō)，只要柱足夠長(zhǎng)，就得獲得理想的分辨率，但由于層析柱流速同
壓力梯度有關(guān)，柱長(zhǎng)增加使流速減慢，峰變寬，分辨率降低。柱的直徑增加，使液體流動(dòng)的不均勻性增加，分辨率明顯下降。
2. 純化過(guò)程必須嚴(yán)格控制脫緩沖液的PH及離子強(qiáng)度。樣品與A-50凝膠必須用洗脫緩沖
液徹底平衡后，才能進(jìn)行柱層析。
3.所裝的柱床必須表面平整，無(wú)溝流及氣泡，否則應(yīng)重裝。
4.洗脫過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格控制流速，且勿過(guò)快。
5. 上樣的體積要小，濃度不宜過(guò)高。
6.加樣及整個(gè)洗脫過(guò)程中，嚴(yán)防柱面變干。

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標(biāo)題:Neutral Polysaccharide from Platycodonis Radix-Ameliorated PM2.5-Induced Lung Injury by Inhibiting the TLR4/NF-κB p65 Pathway and Regulating the Lung and Gut Microbiome

成員:Yang Sun, Yanchun Wang, Zaiming Yang, Xianlei Han, Yue Zhang, Liyan Chen, Jinhai Huo, Rina Wu, Weiming Wang, Nan Wang

論文因子:5.7 發(fā)表期刊:JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY pmid:39626068

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標(biāo)題:Glucosinolate Sulfatases–Sulfatase-Modifying Factors System Enables a Crucifer-Specialized Moth To Pre-detoxify Defensive Glucosinolate of the Host Plant

成員:Wei Chen, Hafiz Sohaib Ahmed Saqib, Xuejiao Xu, Yuhong Dong, Ling Zheng, Yingfang Lai, Xiaodong Jing, Zhanjun Lu, Linyang Sun, Minsheng You, Weiyi He

論文因子:5.895 發(fā)表期刊:JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY pmid:36043275

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標(biāo)題:Enhancement of nanozyme activity by second ligand modification on glutathione protected gold nanoclusters for regulation of intracellular oxidative stress

成員:Mingzhao Jiang, Xinyi Xu, Siyu Liu, Liu Liu, Xuemei Wang, Hui Jiang

論文因子:3.8 發(fā)表期刊:INORGANIC CHEMISTRY COMMUNICATIONS

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DEAE葡聚糖凝膠A-50

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